Dosage du glucose par le DNS

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Le dosage du glucose par le DNS est un dosage colorimétrique du glucose.

Sommaire

1 Principe
2 Protocole

[modifier] Principe

On utilise les propriétés réductrices du glucose. À chaud et en milieu alcalin, il y a réduction de l'acide 3,5-dinitrosalycilique : DNS (acide 2-hydroxy-3,5-dinitrobenzoïque) qui joue le rôle d'oxydant, le glucose étant le réducteur.

Réaction de réduction de l'acide 3,5-dinitrosalicylique en acide 3-amino-2-hydroxy-5-nitrobenzoïque (3-amino-5-nitrosalicylique) :

Le glucose, quant à lui est oxydé en divers produits d'oxydation :

$Glc \longrightarrow produits \, d'oxydation + ne^{-}$

L'acide 3-amino-5-nitrosalicylique est un composé rouge. Cette réaction n'est pas stœchiométrique : il n'y a pas de bilan d'oxydoréduction. L'intensité de la coloration rouge est proportionnelle à la concentration de l'ose si l'on opère dans des conditions physico-chimiques constantes. Les droites d'étalonnage ne passent pas toujours par l'origine.

Cette méthode n'est pas applicable au dosage d'un mélange complexe de glucides réducteurs.

[modifier] Protocole

[modifier] matériel

Spectrophotomètre ;
Tubes à essais lavés et secs ;
Pipette automatique ;
Bechers ;
Cuves à spectrophotomètre.

[modifier] Solutions

DNS;
Solution de glucose à 0.005 mol/L ;
Eau distillée ;
Solution à doser.

[modifier] Etapes

[modifier] Préparation de la gamme d'étalonnage

Dans une série de tubes :

- introduire 0-0,2-0,4-0,6-0,9-1,2 mL de solution de glucose à 0.005 mol/L
- Ajuster chaque tube à 2,5 mL avec de l'eau distillée
- Ajouter 1mL de réactif 3-5 DNS

Mélanger et boucher les tubes avec du coton cardé et du papier aluminium. Porter au bain marie à 100°C pendant 5 minutes exactement. Refroidir et ajouter 7,5 mL (Qsp 10ml) d'eau distillée dans chaque tube, homogénéiser et laisser reposer pendant 15 minutes. Lires les absorbances à 540 nm contre le témoin.

[modifier] Essais

Ils sont à traiter dans les mêmes conditions opératoires.
Réaliser le dosage avec des prises d'essais de 0,5 ml diluées convenablement additionnées d'1ml d'eau distilée et d'1ml de DNS.

Tableau colorimétrique ( résultats expérimentaux )
Tubes	0	1	2	3	4	5
Solution de glucose à 0,005 mol/L en mL	0	0,2	0,4	0,6	0,9	1,2
Eau en mL	1,5	1,3	1,1	0,9	0,6	0,3
DNS en mL	1	1	1	1	1	1
Quantité de glucose en M	0	0,002	0,004	0,006	0,009	0,012

Ce tableau représente ce qui doit être mis dans chaque tube et en quelle quantité.

Catégorie : Technique de laboratoire