Bleu de Coomassie
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Le bleu de Coomassie (également appelé Brilliant Blue, Brilliant Blue G, Acid Blue 90, C.I. 42655, ou Brilliant Blue G 250) est un colorant bleu communément employé en électrophorèse sur gel de polyacrylamide avec sodium dodécyl sulfate (SDS-PAGE). Le gel est trempé dans le colorant pendant 30 minutes, avant d'en être débarrassé trente minutes ou davantage. Ceci permet la visualisation de bandes, indicant la teneur en protéines du gel. La visualisation du gel contient habituellement un "marqueur", qui contient des protéines de poids moléculaire connu, ce qui permet d'évaluer le poids moléculaire des protéines de la solution ou du tissu à tester.
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[modifier] Usage en laboratoire
Le bleu de Coomassie se lie supposément aux protéines via physisorption aux acides aminés basiques (principalement l'arginine) et aux aromatiques. Le bleu de Coomassie est un constituant intégral de la méthode de Bradford, permettant de déterminer la concentration en protéines d'une solution, pour autant qu'on connaisse la séquence de ses acides aminés. Cette méthode est basée sur les propriétés physico-chimiques du bleu de Coomassie, une solution acide dont l'absorbance initiale de 465 nm devient de 595 nm lorsqu'elle est liée aux protéines. Les données d'absorbance peuvent être utilisées avec la loi de Beer afin de déterminer la concentration en protéines ainsi que leur taux dans une solution donnée.
[modifier] Formule des solutions de teinte et lavage
[modifier] Solution de teinte:
- 2.5 g de bleu de Coomassie ,
- 455 ml de méthanol,
- 455 ml d'eau distillée et désionisée (ddH2O),
- 90 ml d'acide acétique glacial (GAA)
(l'éthanol remplace avantageusement le méthanol car beaucoup moins toxique)
[modifier] Solution de lavage (décoloration):
- 455 ml de méthanol,
- 455 ml de ddH2O,
- 90 ml de GAA
(bien que le lavage puise être effectué à l'eau, en chauffant)
Une solution éthanol 10% acide acétique 10% est très efficace surtout chauffée (passage au four à micro-ondes de quelques minutes) et bien moins toxique que le méthanol.
[modifier] Formule classique du réactif de Bradford
- 0.01% de bleu de Coomassie,
- 4.7% d'éthanol,
- 8.5% d'acide phosphorique, in ddH2O.
[modifier] Nom
Comme pour beaucoup de colorants, le bleu de Coomassie tient son nom de la localité africaine de Kumasi, actuellement dans le territoire du Ghana; il était développé comme teinture pour laine acide, et fut nommé en commémoration de l'occupation britannique de la capitale d'Ashanti en 1896, alors appelée Coomassie.[1]
